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构建可诱导表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株及其对大鼠慢性神经痛的镇痛作用
时间：2010-08-23 14:33:39 来源： 作者：
| 方法： 用含有RevTet-On和RevTRE-hPPE的病毒上清感染永生化大鼠星形胶质细胞株（IAST）, 通过G418（400mg/L）和潮霉素（500mg/L）抗性筛选以得到受四环素及其衍生物强力霉素诱导调控表达脑啡肽的大鼠永生化星形胶质细胞株（IAST/ hPPE），通过免疫细胞化学、实时定量PCR及放射免疫分析法检测不同浓度强力霉素对该细胞株脑啡肽表达的定量调节。同时参照Benett和Xie的方法制作大鼠慢性坐骨神经压迫性损伤模型（CCI），然后将IAST/Tet-On/hPPE细胞株植入CCI大鼠的蛛网膜下腔，每周测定大鼠机械痛阈值及腹腔注射强力霉素对其镇痛效应的影响；免疫组织化学检测脊髓背角Fos蛋白表达变化。 结果： 实时定量PCR显示IAST/ hPPE细胞株，hPPE的基因表达受强力霉素调控，其表达强度与剂量有关。Dox浓度为100～5000ng/ml时，随着Dox浓度增高，hPPE的表达随之上调，浓度为2000ng/ml 时达峰值。免疫细胞化学和放射免疫分析法结果也提示IAST/ hPPE细胞分泌脑啡肽也受强力霉素调控，且其分泌量与强力霉素的剂量有关，说明本研究成功构建了受强力霉素调控定量表达脑啡肽的大鼠永生化星形胶质细胞株；当将该细胞株移植到CCI大鼠蛛网膜下腔时，能缓减大鼠慢性神经病理性疼痛，且镇痛效应受强力霉素调控，且移植该细胞的大鼠Fos蛋白表达也降低。 结论： 鞘内移植IAST/Tet-On/hPPE细胞，可以作为一种“生物微泵”分泌大量的脑啡肽，通过作用于脊髓阿片受体而发挥镇痛作用。本研究构建的可调控表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞，可通过增减强力霉素调节脑啡肽的表达量，避免外源基因持续表达带了的副作用。此研究对可控性转基因细胞镇痛领域做了有益的探索，并为将来开发能感知患者疼痛程度并按需释放镇痛物质的“智能型镇痛生物微泵”积累经验。 |
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